活体叶绿素(in vivo chlorophyll)分析是对活细胞内叶绿素荧光的测量。 这种分析的优点是快速简单，不需要特殊的样品制备或提取。 它允许用户每天测量100到1000个样本。 然而，如果不与萃取分析进行比较，活体读数在本质上属于定性分析。

研究目的包括：

•  藻类生物量的垂直和水平剖面

•  藻类管理：

          •  饮用水设施

          •  渔业和水产养殖

环境影响和长期监测方案

•  绘制和跟踪藻类大量繁殖

•  在天然水域中混合和上升流

针对问题：

•  藻类种群如何分布在水体剖面中？

•  是否有藻华正在发育？ 在哪里会暴发？

•  藻类种群是随着时间的推移而增加还是减少？

•  污染对自然事件对生态系统的影响是什么？

变化：

以下生物和环境问题影响体内结果：

1.有机体的健康

  健康的浮游植物将产生较低的荧光响应，每单位叶绿素比衰老的“死亡”浮游植物细胞。

2.有机体的光合过程

  适应明亮光照条件的浮游植物细胞比适应黑暗的浮游植物产生单位叶绿素的低荧光响应。

3.细胞的形态

  细胞和周围细胞材料的组成和形状会干扰荧光信号。

4.细胞的光适应

  每个细胞的叶绿素含量可能因其光可用性而有所不同。

5.浊度

  可根据浊度的化学成分引起散射或阴影效应。

基本校准概念：

1.  从要研究的水体中收集具有代表性的水样。

2.  把仪器做空白。 理想情况下，空白样本应代表被研究水体的成分，不包括浮游植物。 这可以通过0.45μm过滤器过滤水样来去除浮游植物来实现。 如果没有过滤的样品水，去离子水或人工海水可以用作替代品。

3.  用从步骤1中收集的样本校准你的荧光仪，给它一个相对值。 例：50RFU（相对荧光单位）。

4.  读取所有其他样品的荧光相对增加或减少(RFU)。为了最大限度地减少藻类色素因光照而变化而引起的错误读数，建议每天在大约相同的时间采集样本读数，最好是在黎明时。

定量分析：

在相对信息不够的情况下，利用周期性提取叶绿素a分析结合体内分析可以提供更多的定量结果。

1.  如上文所述，对仪器进行校准。

2.  继续研究，收集定期体内样本进行提取分析。 我们建议在环境或水质有可疑或预期变化时，随时收集样品。你可能会发现你会有不同的，体内叶绿素提取叶绿素，不同的野外站或一年中不同的时间的相关性。

    为了获得最好的结果，将收集到的样品保持在寒冷和黑暗中，直到过滤。尽快过滤样品（收集后几个小时内）。 如果过滤后的样品，过滤器没有立即在溶剂中提取，请确保冷藏过滤器，以便以后提取，以减少叶绿素的降解。

3.  在样品收集的确切时间，注意特定样品和标签的体内叶绿素荧光值。

4.  在实验室中，按照EPA445.0标准方法提取体内收集的样品，并用校准的荧光仪或分光度计分析你的提取物。 确定提取浓度与体内记录值的相关性。

所用仪器：

特纳公司提供了一套完整的多功能研究仪器和基于现场的监测仪器。我们的研究仪器可以用于活体和萃取的叶绿素分析以及许多其他应用。 我们的监测仪器旨在检测活体叶绿素，在某些情况下，其他参数，如浊度，取决于所选择的仪器。

研究型仪器包括：

10AU现场荧光仪

Trilogy实验室荧光仪

Aquafluor手持式荧光仪

监测型仪器包括：

Aquafluor手持式荧光仪

在线荧光计

C6多传感器平台

Cyclops-7 传感器

叶绿素分析：

标准：

特纳设计公司还提供叶绿素分析的一级和二级校准标准。 我们的主要标准是90%丙酮中的纯叶绿素a。 浓度已经有950。

每台仪器也有可靠的二级固体标准。 固体标准是由一种非常稳定的荧光材料制成的，荧光波长与叶绿素a相同。该标准可用于快速和容易地检查仪器漂移和重新校准后，初步校准与初步确定，每个标准都有质量控制数据。 我们有荧光计(P/N：10-850)和分光度计(P/N：10-950)的主要标准)。

更多信息可在我们的网站上找到：

美国EPA环保局445.0协议 

http://www.epa.gov/nerlcwww/m445_0.pdf

浊度对体内叶绿素荧光的影响 

http://www.turnerdesigns.com/t2/esci/turbidity_effe cts.html

一级和二级校准标准 

http://www.turnerdesigns.com/t2/instruments/standards_main.html

常见问题及荧光教程  

http://www.turnerdesigns.com/t2/doc/tutorials/main.html

在 In Vivo 校 准 方 法 中 10AU  

http://www.turnerdesigns.com/t2/doc/appnotes/998_0037.html

Trilogy实验室荧光仪

原文 

S-0053.pdf